2023-05-13 03:27:04编辑:中华游戏网
游戏发烧友来看一下缺氧实验,以下6个关于缺氧实验的观点希望能帮助到您找到想要的游戏资讯。
本文目录
1、物理性缺氧模型:即通过降低培养环境的氧分压造成细胞缺氧性损伤,类似于活体发生低张性缺氧。
2、化学性缺氧模型:该缺氧模型是在培养基中加入化学物质,造成细胞用氧障碍或使培养基内的氧气耗尽,如在培养基内加人氰化物、连二亚硫酸钠等。氰化物中的氰离子(CN- )可迅速与细胞内氧化型细胞色素氧化酶的三价铁结合形成氰化高铁细胞色素氧化酶,使之不能还原,电子传递中断,造成细胞用氧障碍;氰化物还阻断线粒体氧化磷酸化,抑制细胞色素C氧化酶,呼吸链中断,引起组织性缺氧。连二亚硫酸钠又称保险粉,为氧结合剂,可在短时间内结合液体培养基内的氧气,造成细胞低张性缺氧。还有用其他化学物质如氧化钴制作缺氧模型的。化学缺氧模型制备简单,可标准化,有一定的重复性,但由于添加的物质可能会改变培养基的化学成分且添加剂本身对细胞有损伤作用,增加了实验的混杂因素,需慎重选用。
3、联合缺氧模型:2种或2种以上方法联合可使细胞缺氧更为明显。如有报道在培养基中添加连二亚硫酸钠,然后将细胞放人95%N2+5%CO2密闭容器中,连二亚硫酸钠已使培养基内氧气耗尽,再置人无氧外环境即可造成稳定的细胞缺氧。
实验十六 几种类型的缺氧及影响缺氧耐受性的因素
一、几种类型的缺氧
【实验目的】
1.在动物身上复制低张性、血液性缺氧,并了解缺氧的分类。
2.观察缺氧对呼吸的影响和血液颜色的变化。
【实验原理】
氧为生命活动所必须。当组织得不到充足的氧,或不能充分利用氧时,组织的代谢、功能,甚至形态结构都可发生异常变化,这一病理过程称为缺氧。本实验将小白鼠放入密闭的缺氧瓶内,小白鼠不断消耗氧气,瓶内氧分压不断下降,复制低张性缺氧。CO与Hb结合形成HbCO,使血红蛋白失去携带氧的能力,本实验将CO通入缺氧瓶内,复制CO中毒性缺氧。亚硝酸钠可使二价铁的血红蛋白氧化成高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与羟基牢固结合而失去携带氧的能力,本实验将亚硝酸钠注射入小白鼠腹腔,复制亚硝酸钠中毒性缺氧。
【材料与方法】
一、实验对象:小白鼠
二、药品和器械:缺氧瓶、注射器、天平、剪刀、钠石灰、5%亚硝酸钠、1%美兰、生理盐水。
三、观察指标:观察动物的一般情况,呼吸频率(次/10秒)及深度,皮肤和口唇的颜色。
四、方法与步骤
(一)低张性缺氧
1.取钠石灰少许(约5克)及小白鼠一只放入缺氧瓶内。观察动物的一般情况,呼吸频率(次/10秒),深度,皮肤和口唇的颜色,然后塞紧瓶塞,记录时间,然后每3分钟重复观察上述指标一次(如有其他变化则随时记录)直到动物死亡为止。
2.动物尸体留待2、3实验做完后,再依次打开腹腔,比较血液或肝脏颜色。
(二)CO中毒性缺氧
1.取小白鼠一只放入缺氧瓶中,观察其正常表现。
2.用注射器抽CO 2~4ml,缓慢注入瓶中。
3.观察指标与方法同(一)。
(三)亚硝酸钠中毒性缺氧
1.取体重相近的两只小白鼠,观察正常表现后,分别向腹腔注入5%亚硝酸钠0.3ml,其中一只注入亚硝酸钠后,立即再向腹腔内注入1%美兰0.3ml,另一只再注入生理盐水0.3ml。
2.观察指标与方法同(一)。
【注意事项】:
1.低张性缺氧实验,缺氧瓶一定要密闭。
2.小白鼠腹腔注射,应稍靠左下腹,勿损伤肝脏,但也应避免将药物注入肠腔或膀胱。
3.CO已于实验前置备完毕,装于贮气袋。
二、影响缺氧耐受性的因素
【实验目的】
了解条件因素在缺氧发生中的重要性和临床应用冬眠和低温治疗的实用意义。
【实验原理】
病因为疾病发生所必须并决定疾病的特异性的因素。疾病发生还取决于机体所处的内部与外部条件,条件可通过增强或削弱病因的致病性,改变机体对疾病病因的耐受性,促进或延缓疾病的发生。本实验通过改变机体的内部与外部条件,观察小白鼠对缺氧耐受性的变化。
【材料与方法】
一、实验对象:小白鼠
二、器械和药品:缺氧瓶、测氧仪、天平、注射器、温度计、烧杯、钠石灰、1%咖啡因、0.25%氯丙嗪、生理盐水。
三、观察指标:存活时间、耗氧量、耗氧率。
四、方法与步骤
(一)环境温度变化对缺氧耐受性的影响
1.取缺氧瓶三只,各放入钠石灰少许。
2.取500毫升烧杯两只,一只加入碎冰块和冷水,将杯内水温调到0~4℃,另一只加入热水,将温度调到40~42℃。
3.取体重相近的小白鼠三只,称重后分别装入缺氧瓶中,其中的两只分别放于盛有冰水或热水的烧杯内,另一只置于室温中,塞紧瓶塞后开始计时。
4.持续观察各鼠在瓶中的活动情况,待小白鼠死亡后,计算存活时间,并立即从烧杯内取出缺氧瓶,置于室温中平衡15分钟。
5.用测氧仪测定瓶内空气的剩余氧浓度,方法见附录1。或用测耗氧量装置测定总耗氧量(A),方法见附录2。然后再用测瓶内气体容积装置测出瓶内空气的容积(,方法见附录3。
6.如有血气分析仪,可直接测定瓶内空气的氧含量。
7.根据小白鼠体重(W),存活时间,总耗氧量 ,计算小白鼠耗氧率(R)ml/g/min。
计算方法:
(1)由测氧仪测得瓶内空气的剩余氧浓度(C)和用测瓶内气体容积装置测出瓶内空气的容积(,求总耗氧量(A)
A(ml)=(20.94%-C)× B
(2)小白鼠耗氧率(R) R(ml/g/min)=A÷体重(克)÷存活时间(分)
(二)机体状况不同对缺氧耐受性的影响
1.取体重相近的小白鼠 三只,分别作如下处理:
甲鼠,腹腔注射1%咖啡因0.1ml/10g体重。
乙鼠,腹腔注射0.25%氯丙嗪0.1ml/10g体重,待动物安静后,全身浸入冰水5-10分钟。
丙鼠,腹腔注射生理盐水0.1ml/10g体重
2.约15-20分钟后,将三只小白鼠分别放入有钠石灰的缺氧瓶内,密闭后开始计时
3.以下步骤同一的5、6、7步骤。
【实验结果】
绘制三线表填入所观察各项指标的数据。
【注意事项】:
1.必须保证缺氧瓶完全密闭。
2.测剩余氧浓度前,作高、低温实验的两只缺氧瓶必须放在室温平衡15分钟左右。
【要求与思考】
学生课前应复习《病理生理学》“缺氧”的内容,依据缺氧的理论和实验内容,联系实际讨论第十章病例一、病例二,各实验组推荐一名学生代表作课堂发言。
【作业题】
1.低张性缺氧、血液性缺氧对呼吸有何影响?为什么?
2.低张性缺氧、CO中毒性缺氧、亚硝酸钠中毒性缺氧血液颜色有何不同?为什么?
3.美兰为什么使亚硝酸钠中毒小白鼠存活时间延长?
4.当外界环境温度逐渐降低时,小白鼠对缺氧的耐受性有何变化?为什么?
5.神经系统处于兴奋或抑制状态对小白鼠的缺氧耐受性产生何种影响?为什么?
附录1 氧电极法测定瓶内空气氧浓度(%)的方法
1.原理
氧电极法测定的原理是利用溶解的氧分子在一定的极化电压下,被还原而产生电流。
O2+2H++2e- H20
当测定系统将电极与被测溶液用仅能通过气体分子的聚乙烯薄膜隔开时,在一定极化电压下,电极中测出的电流量将只反映被测系统中弥散过来的氧分子,并与被测溶液中的氧分压成正比。
2.方法与步骤
(1)按测氧仪说明书安装电极,检查电池电压,调整极化电压和调节零点。
(2)将已装好的氧电极插入仪器的“输入”孔,进行电极的灵敏度调节;先用新鲜配制的无氧水,以缓慢的速度从电极进样管,注入样品池内,校正零点。然后用已知氧浓度的混合气体,调节灵敏度至刻度。重复以上操作1~2次,使重现性误差小于读数误差的2.5% 。
(3)将缺氧瓶塞上的一个橡皮管同测瓶内空气容积装置相接,装置内的水即因负压而进入缺氧瓶内。然后将另一橡皮管同测氧仪的电极进样管相连,并从电极出样管缓慢抽气,使缺氧瓶内气体缓慢进入测氧仪的测量池。待测氧仪的表头指针稳定后,直接读出瓶内空气剩余氧浓度(C)。
附录2 用测耗氧量装置测定小白鼠的总耗氧量
1.原理
小白鼠在密闭的缺氧瓶内,不断消耗氧气,而产生的CO2又被钠石灰吸收,瓶内氧分压逐渐降低而产生负压,当缺氧瓶与测耗氧量装置相连时,装置的移液管内液面因瓶内负压而上升,量筒内液面下降的毫升数即为消耗氧的总量。
2.方法与步骤
(1)向量筒内充水至刻度,然后将玻璃管接头与缺氧瓶塞上的一个橡皮管相连。
(2)打开上述橡皮管上的螺旋夹,待移液管内水平面上升稳定后,从量筒上读出液面下降的毫升数,即为小白鼠的总耗氧量(A)。
附录3 测缺氧瓶内空气容积的方法
(1)将测瓶内空气容积装置的全部系统内充满水,并向量筒内加水至刻度。
(2)将缺氧瓶塞上的两橡皮管全部打开,其中之一与装置相连。
(3)装置内水因虹吸作用进入缺氧瓶内,待瓶内全部充满水时立即夹紧装置上的弹簧夹。
(4)读出量筒上液面下降的毫升数,即为缺氧瓶内空气的容积。
如下:
通过复制3种不同类型的缺氧模型,包括乏氧性缺氧、一氧化碳中毒性缺氧、亚硝酸钠中毒性缺氧,观察观察动物一般状况、呼吸频率和深度、存活时间和皮肤黏膜肝脏颜色等指标,了解不同类型缺氧的表现特征。
不同类型缺氧的表现特征不同,乏氧性缺氧可使小白鼠呼吸先加深加快而后逐渐衰竭,皮肤黏膜肝脏颜色为紫绀色;CO 中毒性缺氧可使小白鼠呼吸无明显变化,皮肤黏膜肝脏颜色为樱桃红色;亚硝酸钠中毒性缺氧可使小鼠呼吸无明显变化,皮肤黏膜肝脏颜色为棕褐色。
实验目的:了解缺氧的分类;复制不同类型的缺氧模型;观察不同类型缺氧时呼吸节律和皮肤黏膜颜色的变化规律,了解不同类型缺氧的表现特征。
一氧化碳中毒性缺氧
属血液性缺氧(等张性缺氧),即由于血红蛋白数量减少或性质改变,以致血液携带氧的能力降低或血红蛋白结合的氧不易释出所引起的缺氧。
CO是含碳物质未完全燃烧而产生的一种窒息性气体,可与血红蛋白结合成为碳氧血红蛋白而使血红蛋白失去携带氧的能力,抑制红细胞的糖酵解,增加与氧的亲和力,致使小白鼠皮肤黏膜呈现樱桃红色。
CO 中毒性缺氧属等张性缺氧,呼吸系统的代偿不明显,故观察到小白鼠的呼吸逐渐减弱直至停止死亡。
急性缺氧实验中制备的三种小鼠原理如下。1、一氧化碳中毒性缺氧。2、组织性缺氧,化中毒性缺氧。3、亚硝酸钠中毒性缺氧。
实验性缺氧
发布日期:2028-09-03 文章来源: 浏览次数:1111
摘要
为掌握各型缺氧的特点并观察其对机体的影响,本实验通过制造乏氧环境,制造CO中毒环境,腹腔注射亚硝酸钠的方法复制了低张性,血液性,组织中毒性缺氧动物模型。对缺氧后小鼠行为状态,呼吸频率幅度,存活时间,每分钟耗氧量,皮肤黏膜,肝脏颜色等生理指标变化做了仔细的观察与记录。结果与对照组相比均有明显变化,与相关报道一致。证实了我们的推测并亲自验证了甲苯氨蓝的生物学作用。
关键词:缺氧;小鼠;生理指标变化
实验性缺氧
1前言
1. 1目的与任务
1.掌握各型缺氧的特点及对机体的影响
2.观察机体不同机能状态对缺氧耐受性的影响
3.了解条件因素在缺氧发病中的重要性及其临床意义
4.了解几种缺氧疾病的基本致病机理和应对办法
1.2缺氧事故现状
一氧化碳(CO)是无色、无味、无臭、无刺激性,从感观上难以鉴别的气体。亚硝酸钠为白色的晶体或粉末,有咸味,毒性很强,误食0.3 g~0.5 g,就会中毒,10分钟后就会出现明显的中毒症状,如呕吐、腹痛、紫绀、呼吸困难等。甚至抽搐、昏迷,严重时还会危及生命。
1.3原理与意义
O2是机体维持正常的生理活动所不可缺少的重要物质,它在血液中主要以HbO2的形式存在和运输。呼吸环境中氧的缺乏和氧利用结合的受阻都可使机体产生明显的生理反应。本实验是通过不同的方法给机体制造出不同类型的缺氧条件(低张性,CO中毒性,亚硝酸钠中毒性),观察其对机体所造成的影响和各自的特点,并利用化学药品观察机体在不同机能状态下对同一缺氧条件的耐受性。对于缺氧发病的研究和治疗有一定的临床意义。
2材料与方法
2.1实验动物
小白鼠
2.2仪器与试剂
耗氧量测定装置,CO发生装置,125ml广口瓶,1ml注射器,剪刀,手术刀,吸管,镊子等
钠石灰,甲酸,浓硫酸,1:10000肾上腺素,1:10000乙酰胆碱,5%亚硝酸钠,1%甲苯氨蓝
2.3观察指标
1.一般状态,行为
2.呼吸频率,幅度
3.每分钟耗氧量(min)
4.存活时间(min)
5.皮肤黏膜和血液(肝脏)颜色
2.4实验过程
2.4.1低张性缺氧
(1)将小鼠称重并标记,取体重相近小鼠三只,分别做以下处理:
甲 腹腔注射1:10000肾上腺素0.1ml
乙 腹腔注射1:10000乙酰胆碱0.1ml
丙 腹腔注射生理盐水0.1ml,作为对照
(2)5min后,放入装有5g钠石灰的广口瓶,连通耗氧装置(如图2.4.1),开始计时,观察小鼠行为变化,记录上述指标,二十分钟后取出处死。
(3)解剖动物尸体,观察肝脏和血液颜色。
2.4.2CO中毒性缺氧
(1)将装有小白鼠的广口瓶与CO发生装置连接。(如图2.4.2)
(2)用吸管吸取HCOOH3ml放入试管后,再沿管壁缓慢加入2ml浓H2SO4,立即塞紧瓶塞,观察小鼠行为变化,记录上述指标变化,直至死亡。
反应式:HCOOH-----H2O+CO
(3)解剖动物尸体,观察肝脏和血液颜色。
图2.4.1

图2.4.2

2.4.3亚硝酸钠中毒性缺氧
(1)取小白鼠两只,观察正常表现后做以下处理:
甲 腹腔注射5%亚硝酸钠0.3ml,再立即注射1%甲苯氨蓝0.3ml
乙 腹腔注射5%亚硝酸钠0.3ml,再立即注射生理盐水0.3ml作为对照
(2)观察小鼠行为变化,记录上述指标,直至死亡。
(3)解剖动物尸体,观察肝脏和血液颜色。
3.结果
3.1低张性缺氧
表3.1
一般状态
行为
呼吸频率幅度变化
总耗氧量
每分钟
耗氧量
肝脏,皮肤黏膜颜色
甲(28.9g雄)
较活泼
加快加大
25ml
1.25ml
颜色稍深
乙(28.9g雄)
很活泼
明显加快加大
27ml
1.35ml
颜色稍深
丙(26.6g雄)
稍活泼
明加快加大
13ml
0.65ml
颜色稍深
(1) 甲鼠在注射肾上腺素后行为状态比较活泼,放入广口瓶后较安静。5min后呼吸频率开始加大,并渐渐闭上眼睛。9min时耗氧4ml,开始躁动不安。13min时乱爬,呼吸变得非常急促。15min时趴下安静不动,急促呼吸。20min时耗氧25ml。
(2) 乙鼠在注射乙酰胆碱后非常活泼,放入广口瓶后也在不断活动,7min时耗氧4ml,呼吸频率加快明显。13min时耗氧20ml,这期间一直在不停活动,洗脸,向上爬,在瓶内乱转。15min耗氧23ml,稍显安静,呼吸非常急促。20min时耗氧27ml。
(3) 丙鼠注射了同等剂量的生理盐水,为对照组。在广口瓶内时而活泼时而安静,5min时耗氧2ml,10min时耗氧5ml, 呼吸频率有所加快, 12min时耗氧8ml,呼吸稍显急促, 20min时耗氧13ml。
3.2 CO中毒性缺氧
小鼠(25.3g雄)刚放入瓶内时较安静,量筒内有气泡冒出时表明已有CO通入瓶内,此时计时。1min30s后,开始剧烈跳跃挣扎,3min30s后,趴在瓶底四肢抽搐,仍在呼吸,3min55s时死亡。
尸体全身发红,解剖后肝脏,黏膜等呈樱桃红色。
3.3亚硝酸钠中毒性缺氧
这一步实验发生了一点意外,由于实验准备时的一时疏忽,所配置的亚硝酸钠溶液浓度过低,给两只小鼠注射后均无明显中毒反应。甲鼠在注射甲苯氨蓝后,变得不活泼,动作迟缓,闭眼,腹部紧贴瓶底,后肢运动不协调。乙鼠为注射生理盐水对照组,正常。
发现错误后,我们及时做了补救措施,马上配制5%亚硝酸钠溶液并立即给两只小鼠注射,现象如下:
(1) 甲鼠(24.7g雄)无明显中毒迹象,而且运动状态渐渐恢复正常,开始在瓶内活动。12min5s后死亡。
尸体全身青紫,腹部皮肤蓝色,肝脏深咖啡色。
(2) 乙鼠(23.5g雄)3min后变得非常活泼,上窜下跳,甚至跳出瓶口。4min时开始抽搐,仍然蹦跳。5min时趴在瓶底抽搐。5min30s后死亡。
尸体全身皮肤黏膜青紫,肝脏为深咖啡色。
4.讨论与结论
氧可对机体产生许多不良影响,轻者可通过机体的代偿作用如增强呼吸运动,维持重要生命器官的需要,重者影响能量代谢,导致器官,细胞发生一系列形态结构,机能代谢的变化及组织器官的变性坏死。
4.1低张性缺氧
由于原定的药品咖啡因,氯丙嗪不易获得,因此改为肾上腺素和乙酰胆碱作为替代品,因此所得的实验结果与预计中不同也是正常的。因为咖啡因和氯丙嗪分别为中枢神经兴奋剂和抑制剂,可分别使小鼠处于中枢神经兴奋和抑制状态。这样甲鼠会比乙鼠更加活泼好动,呼吸频率幅度更大,每分钟耗氧量更大。而肾上腺素通过与心肌细胞膜上的β型肾上腺素能受体结合,使心房肌和心室肌收缩力加强,使小鼠血压升高心率加快,每分钟耗氧量有所增加,但并没有使小鼠处于中枢神经兴奋状态,因此甲鼠并未表现得特别活泼。相反,乙酰胆碱虽然可与心肌细胞膜的M型乙酰胆碱受体结合,引起心脏活动的抑制,但它却是中枢神经系统的重要递质,在中枢内分布较广,主要起兴奋性递质的作用。这就是说乙鼠不但没有处在中枢神经抑制状态反到处于中枢神经兴奋状态,因此在实验中表现得非常活泼,呼吸频率幅度变化明显,每分钟耗氧量最大。丙鼠为对照,表现正常,每分钟耗氧量最小。实验结果与理论事实完全相符。
这一步实验是探索性的,因为实验前我完全不了解肾上腺素和乙酰胆碱会对小鼠的缺氧耐受性有怎样的影响。通过实验结果结合相关的理论知识我得出了以上结论。
4.2 CO中毒性缺氧
(1)在柴老师的帮助下,我改进了原有的CO发生装置(如图2.4.2),在广口瓶添加一个倒气管,将出口插入盛有水的量筒。一方面可使CO顺利导入,一方面当量筒内有气泡冒出时即表明CO已成功导入,可以开始计时。由于实验室通风,CO量少不会造成危险。
(2)血液中O2主要是以血红蛋白HbO2的形式存在和运输的,但是CO与Hb的亲和力是O2的250倍,这就意味着在极低的Pco下,CO就可以剥夺O2的结合位点,从HbO2中取代O2,使机体处于缺氧状态导致死亡。由实验可见,CO与Hb的亲和力很大,结合速度很快,因此致死速度很快,小鼠的存活时间仅为3min55s。因为CO取代了O2与Hb结合呈樱桃红色,所以皮肤黏膜和肝脏颜色为樱桃红色。
这一步实验是验证性的,通过实验结果完美的验证了以上结论。
4.3亚硝酸钠中毒性缺氧
(1) 血红蛋白所含的铁是亚铁,它能跟氧结合随着血液循环,将氧输送到身体各部。
当亚硝酸钠进入机体后,在血液中发生了化学反应,使血红蛋白中的二价铁转变成三价铁,而三价铁的血红蛋白不能携带氧,因此造成小鼠缺氧中毒。
(2)由于美兰暂时无法获得,在柴老师的建议下,改为用甲苯氨蓝作为替代药品。由实验结果可以看出,乙鼠很快出现亚硝酸钠中毒症状,并在5min30s后死亡。而注射了甲苯氨蓝的甲鼠则没有明显中毒症状,因为甲苯氨蓝将血红蛋白中的三价铁还原为二价铁,使血红蛋白重新与氧结合,缓解了亚硝酸钠造成的中毒症状。乙鼠存活12min5s后死亡。
这一步实验也是探索性的,实验前对于甲苯氨蓝的具体作用我们并不确定,只是猜测它有可能缓解亚硝酸钠造成的中毒症状。通过实验和相关的理论知识,很好的证明了我们的推测,证实了以上结论。
新生儿缺氧缺血性脑病HIE(围产期窒息导致脑的缺氧缺血性损害)是新生儿时期严重疾病之一,危害很大。一氧化碳,亚硝酸钠中毒事故每年都有发生,夺去了多少人的生命。加强预防和改进临床治疗办法是造福于社会的大事,应当高度重视。通过本次实验我们了解了上述几种常见缺氧疾病的基本致病机理和应对办法,这对于我们今后从事这方面疾病的研究和治疗有着重要的意义。
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